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IPTG简介及应用
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)是南京探求生物技术有限公司优势产品,品质优异稳定,长期大量现货供应。
以下是其技术参数的详细说明:
基本信息
· 化学名称:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷
· 英文名称:Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside
· 化学式:C₉H₁₈O₅S。
· 分子量:238.30 g/mol。
· CAS号:367-93-1
技术参数
· 外观:白色结晶粉末。
· 纯度:≥99.5%。
· 水分≤1%
储存条件
· 储存条件:2~8℃避光干燥保存,有效期3年。
· 溶液保存建议:配制成母液(如100 mM)后需分装避光保存于-20℃,避免反复冻融降解。
应用领域
1. 原核基因表达诱导
o 作用机制:作为乳糖类似物结合lac操纵子阻遏蛋白,解除抑制,启动下游基因(如T7/lac启动子)转录。
o 特点:不被β-半乳糖苷酶分解,诱导效果持久。
o 使用方法:在细菌对数生长期(OD₆₀₀≈0.6)加入,终浓度0.1–1 mM,诱导数小时至过夜。
2. 蓝白斑筛选
o 原理:与X-gal联用,IPTG诱导lacZα表达,分解X-gal产生蓝色产物;克隆插入片段会中断α肽,形成白色菌落。
o 应用场景:重组质粒筛选(如pUC系列载体)。
3. 蛋白表达优化
o 调控表达强度:通过调整IPTG浓度控制表达水平,避免包涵体过度形成(低浓度诱导可促进可溶蛋白)。
4. 其他应用
o 报告基因检测:用于lacZ等报告基因的激活实验。
o 细菌双杂交系统:诱导特定蛋白互作研究。
注意事项
· 浓度优化:过高浓度可能导致非特异性效应或细胞应激。
· 无菌操作:溶液需过滤除菌,避免污染。
· 替代物:对乳糖操纵子敏感的实验中,可用乳糖替代(但需注意代谢差异)。